González-López, L., Peraile Muñoz, I., Rozas Sanz, G., Cabria Ramos, J. C. y Lorenzo Lozano, P. tiempo, tienen bajos niveles de sensibilidad y no siempre es po-sible la obtención de cultivos virales in vitro, por lo que se hace necesaria la aplicación de una tecnología que permita identifi-car el agente etiológico de la enfermedad de forma sencilla. El desarrollo de diferentes tecnologías en el ámbito de la biología molecular permite en la actualidad realizar un diagnóstico tem-prano y rápido de la presencia de agentes virales en muestras na-turales6. Las metodologías basadas en la amplificación de ADN a partir de cantidades muy bajas de ADN molde (detección por la reacción en cadena de la polimerasa, PCR; del inglés, “Poly-merasa Chain-Reaction”) pueden no ser apropiadas en el caso de agentes virales, dado la gran variabilidad que presentan en lo referente a la naturaleza y estructura de sus genomas7,8. Por todo ello, la versatilidad de la tecnología de micromatrices de ADN, capaz de crear diseños “a la carta” con nuevas sondas específicas, se presenta como un sistema de biodetección ideal para estos agentes con genomas tan variables, superando las limitaciones de las tecnologías basadas en PCR9,10,11. MATERIAL Y MÉTODOS Elección de virus patogénicos Se seleccionaron nueve familias de virus de interés en bio-defensa (Arenaviridae, Bunyaviridae, Flaviviridae, Paramyxovi-ridae, 152 Sanid. mil. 2018; 74 (3) Picornaviridae, Poxviridae, Rhabdoviridae, Togaviridae y Orthomyxoviridae) cuyos integrantes presentan la mayor parte de las características de un agente de guerra biológica: alta viru-lencia, fácil transmisión, inmunidad no generalizada, ausencia de tratamiento efectivo y posibilidad de ser producidos y mul-tiplicados en un laboratorio con unas infraestructuras mínimas. Identificación de los genomas de los virus de interés Se obtuvo la secuencia de los genomas de varias especies de las familias indicadas anteriormente en la base de datos del NCBI <https://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome>. Diseño de sondas específicas para la identificación de los virus de interés Se identificaron fragmentos de 60 nucleótidos que cumplie-ran determinados condicionantes estructurales, en base a pará-metros físicos como el contenido en Guanina y Citosina (G+C), la temperatura de fusión (Tm; del inglés, “Temperature of mel-ting”) 12, y la probabilidad de formar estructuras secundarias in-tramoleculares. Tabla 1. Características de los genomas de los virus de interés. Familia Virus de referencia Acrónimo Cepa Tamaño (b) Genes NChr1 Arenaviridae Género Arenavirus ssRNA de 10 kb de longitud, 2 cromosomas: L virus de la Coriomeningitis Linfocítica LCM-1 Armstrong 53b 10.056 4 2 y S. virus Tacaribe TCRV 10.534 4 2 Bunyaviridae Género Hantavirus ssRNA de 11,5 kb de longitud, 3 cromosomas: L, M y S. virus Hantaan de la Fiebre Hemorrágica de Corea HTNV 76-118 11.845 3 3 Género Phlebovirus virus de la Fiebre del Valle del Rift RVFV ZH-548 11.979 4 3 Flaviviridae Género Flavivirus ssRNA +. virus del Dengue tipo 3 DENV3 D3/H/IMTSSA 10.707 1 1 virus de la Fiebre Amarilla YFV cepa 17D 10.862 1 1 virus del Nilo Occidental WNV 956 10.962 3 1 Paramyxoviridae Género Paramyxoviridae ssRNA - de15-20 kb de longitud. virus Hendra HeV 18.234 8 1 Picornaviridae Género Aphthovirus ssRNA + de 7,5-8,5 kb de longitud. Aftovirus o virus de la Fiebre Aftosa, serotipo O VFA FMDV serotipo O 8.134 1 1 Poxviridae Género Chordopoxviridae dsDNA de más de 150 kb de longitud. virus Vaccinia VACV Western Reserve 194.711 223 1 Rhabdoviridae Género Tibrovirus ssRNA - de 12 kb de longitud. virus de la Estomatitis Vesicular VEV 11.161 6 1 Togaviridae Género Alphavirus ssRNA - de 12 kb de longitud. virus de la Encefalomielitis Equina Venezolana VEE ssp. North American 11.444 4 1 Orthomyxoviridae Género Influenza virus A ssRNA -. Virus de la Gripe A estirpe H1N1 H1N1 A/Puerto Rico/8/34 13.588 12 8 NChr1: número de fragmentos o cromosomas en los que se distribuye el genoma.
Revista-Sanidad-Militar-74-3
To see the actual publication please follow the link above