Guamán Collaguazo CE., et. al. Los valores de flujo de fase móvil ensayados fueron: 0,2; 0,4; 0,5; 0,6 y 0,7 mL/min. En la tabla 3 se muestran los valores de los diferentes pará-metros del detector de masas de tiempo de vuelo utilizados en los ensayos realizados. Análisis de resultados Se realizó el estudio del pico cromatográfico correspondien-te a ocratoxina A obtenido a una concentración de 1 ppm. Las características analizadas fueron la simetría, área, anchura y al-tura de este pico, así como el tiempo de retención al que apare-cía. Además, se realizó un cromatograma de extracción de iones (EIC) para completar dicho estudio. Los resultados obtenidos de este análisis permitieron la selección del método cromatográ-fico optimizado cuyos parámetros cromatográficos y del detec-tor se muestran en las tablas 4 y 5. 232 Sanid. mil. 2018; 74 (4) Figura 2. Cromatograma de HPLC-MSD(TOF) de ocratoxina A (1ppm). Figura 3. Espectro de masas de ocratoxina A. RESULTADOS En la mayoría de los ensayos llevados a cabo se obtuvo un pico cromatográfico correspondiente a ocratoxina A. El cromatograma obtenido con el método optimizado mos-tró el pico de OTA a un tiempo de retención de 1,791 ± 0,009 minutos y un área de pico de 5 x 106 (Figura 2). En su espectro de masas (Figura 3) se observa el ion molecu-lar M+H+ con una masa exacta de 404,07986 uma, así como su perfil isotópico característico (Figura 4). Tabla 3. Valores de los parámetros del detector de masas (TOF) ensayados. Parámetros del detector de masas (TOF) Valores Presión del nebulizador (psi) 30, 40, 50, 60 Flujo del gas de secado (L/min) 10, 12, 13 Voltaje del capilar (V) 3000, 3500, 4000 Fragmentador (V) 50, 100, 150 Tabla 4. Condiciones cromatográficas empleadas para la detección e identificación de OTA. Parámetros Valores Columna Zorbax SB-C18, 2,1 x 150 mm (5μm) Temperatura columna 40 ºC Volumen de inyección 10 μL Fase móvil Isocrático, ACN:Ácido Fórmico 0,1% (1:1) (v/v) Flujo 0,7 mL/min Duración del ensayo 10 minutos Tabla 5. Condiciones del MSD-TOF empleadas para la detección e identificación de OTA. Parámetros Valores Fuente de ionización Electrospray Polaridad Positiva Presión nebulizador 50 psi Flujo de gas de secado 13 L/min. Temperatura de gas de secado 350 ºC Voltaje del capilar 3500V Fragmentador 100V Target mass M+H+ Figura 4. Perfil isotópico de ocratoxina A. Tabla 6. Abundancias del ion molecular de ocratoxina A. m/z Abundancia 404,07986 28809 405,08292 5735 406,07749 9271
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